Para la obtención  de cromosomas de linfocitos T (CD4), se utiliza sangre periférica, ya que es el más fácil de obtener, además de ser un método rápido, económico y no requiere de técnicas invasivas para obtener la muestra; y además proporciona una gran cantidad de células (linfocitos) en una sola toma. Para dicha obtención se utiliza heparina como anticoagulante, ya que este consigue la coagulación principalmente mediante proteoglicanos de sulfatos de heparina derivados de las células endoteliales, y no ejerce su función mediante la quelación del Ca2+ que es indispensable para la proliferación, crecimiento,  y buen funcionamiento de las células (linfocitos) (Solari, 2004).

El cultivo utilizados es el RPMI 1640, que contiene nutrientes como vitaminas, aminoacidos que son esenciales para el crecimiento de las células, este también tiene una mezcla de antibióticos, Penicilina-Estreptomicina, esto para evitar que el cultivo se contaminara con bacterias que pudieran privar a las células de los nutrientes (Ascarrunz, 2005). 

A dicho culivo se le agrega fitohemaglutinina (PHA), el cual  es un agente mitogénico derivado de extractos de las semillas de Phaseolus vulgaris, este causa la aglutinación de los eritrocitos y estimula la mitosis progresiva de los linfocitos T (CD34)  en cultivos celulares (Remel Europe, 2013) mediante el reingreso de las células en el ciclo celular debido a la inducción de los genes Hox, desde hoxb1 hasta Hoxb9, los cuales codifican para proteínas que usualmente funcionan como factores de transcripción que controlan procesos de diferenciación y desarrollo (Rodríguez, 2005).

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El cultivo se debe mantener en incubación durante 71 h a 37 ºC, para obtener la mayor cantidad de células en división. No se deja por mayor tiempo debido a que los nutrientes del cultivo se terminan agotando, dejando de ser funcional para la experimentación, además de que pasado cierto tiempo, las células alcanzan un estado de confluencia, donde establecen contacto entre ellas e inhiben su proliferación. Asimismo, se incuban a 37 ºC ya que es la temperatura óptima a la cual se mantienen los linfocitos en el cuerpo humano (Pack, 2002 ).

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Una vez transcurrido el tiempo de incubación, se agrega colchicina al 0.04 %, esto con la finalidad de detener al mayor número de células (linfocitos) en metafase, puesto que es un fármaco antimitótico, que tiene acción sobre las proteínas citoesqueléticas del huso mitótico denominadas tubulinas, lo cual ocasiona que los cromosomas no puedan migrar, deteniéndose por completo el proceso de división celular en metafase (Galan, 2002).

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Para la cosecha de los linfocitos, se agrega en primera instancia solución hipotónica (KCL-0.075M) con EDTA, para hinchar los núcleos y permitir la lisis de los eritrocitos, así como permitir posteriormente la buena dispersión y separación de los cromosomas, el EDTA, permite romper las membranas celulares, tras ello, se agrega solución fijadora de metanol/ácido acético (3:1)  para la lisis celular y preservación integral de la estructura de los cromosomas (Tompson, 2008), realizándose varios lavados para eliminar todos los residuos del medio de cultivo utilizado así como los compuestos que se adicionaron.

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Una vez terminada la cosecha, se gotean de 3-4 gotas de la suspensión en un portaobjetos, desde una altura de metro y medio para poder hacer explotar a las células y se esparzan correctamente los cromosomas en el portaobjetos. Paso siguiente a esto se dejan madurar las laminillas, para después teñirlas con la tinción de Giemsa y al final poder observarlas, esta tinción mencionada es de tipo Romanowsky, es decir, que utiliza azul de metileno y sus productos de oxidación (azur A, B y C) como colorante básico, y al tener un pH básico se unirá a estructuras y moléculas ácidas, como el DNA, por lo que teñirá de azul o púrpura los núcleos, así también, se emplea eosina como colorante ácido, por lo que se une a estructuras básicas como el citoplasma, tiñendo de color rosado. Cabe mencionar también, que el azul de metileno se une fuertemente a las regiones ricas en adeninas y timinas del DNA (Madrigal, 2002).